Andrologia-acesso aberto
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Abstrato

Nível de condensação da cromatina do esperma: dependendo dos fixadores

Tulay Irez, Tugce Durmus

A cromatina do esperma sofre alterações estruturais durante a espermatogênese, causando alta condensação. Essa troca nuclear é considerada um preditor da capacidade de fertilização do esperma e do resultado da gravidez. Vários estudos mostraram uma relação entre infertilidade masculina e deficiência de protamina no esperma, e foi sugerido que pode ser um determinante importante da integridade do DNA do esperma. A coloração com azul de anilina ácida é frequentemente usada com fixação de glutaraldeído e cora histonas devido à lisina no núcleo do esperma. Pesquisas mostraram que o nível de histonas no núcleo do esperma está intimamente relacionado a danos no DNA e infertilidade. A condensação da cromatina do esperma é expressa pela presença de protamina no núcleo do esperma, ou seja, a ausência de histona. Neste estudo, investigamos como o método de coloração com azul de anilina pode determinar corretamente a condensação da cromatina do esperma quando diferentes métodos de fixação são aplicados. Quatro fixadores diferentes foram usados ​​neste estudo. Os fixadores foram aplicados com glutaraldeído (2,5%), metanol/ácido acético Carney's (3/1), álcool etílico (98%) e corante azul de anilina formaldeído (10%), conforme aplicado em concentrações convencionais em preparações citológicas. Destes fixadores, o glutaraldeído é amplamente usado para exibir histonas de esperma. O teste T de Student e a análise de variância de medidas repetidas foram realizados para calcular as diferenças nas taxas de condensação da cromatina (azul de anilina negativo) entre diferentes fixadores. Quando os valores de condensação da cromatina obtidos com a fixação de glutaraldeído foram comparados com aqueles obtidos com a fixação de metanol e álcool, diferenças estatisticamente significativas (p = 0,014, p = 0,0001) foram observadas. Foi observada uma correlação positiva entre glutaraldeído e formaldeído (p=0,51) e uma correlação negativa entre glutaraldeído e formaldeído, fixação de metanol/ácido acético e álcool (p=0,005,p=0,0005 Ve p=0,0005,p=0,007). Foi determinada a correlação positiva da condensação da cromatina com a concentração e motilidade dos espermatozoides (p=0,012,p<0,001). De acordo com os resultados obtidos neste estudo, as fixações de glutaraldeído a 2,5% e formaldeído a 10% foram apropriadas para determinar a condensação da cromatina com azul de anilina, mas metanol/ácido acético e álcool etílico não são adequados para esse propósito. Foi observado que os fixadores à base de álcool que testamos em nosso estudo não mostraram especificamente as lisinas dos espermatozoides e fizeram com que todo o núcleo fosse corado com azul de anilina.