Andrologia-acesso aberto
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Abstrato

Compreendendo o fluxo de trabalho de preparação de amostras: preparação semiautomatizada de testosterona sérica para detecção usando LC-MS/MS

Ramisa Fariha, Collin Hill, Mohannad Jabrah, Adam Spooner, Anubhav Tripathi*

A cromatografia líquida de alta performance-espectrometria de massas em tandem tem sido essencial para os recentes avanços clínicos na detecção e monitoramento da progressão de diferentes distúrbios metabólicos. Tais sistemas têm sido usados ​​para monitorar rotineiramente os níveis séricos de testosterona em pacientes, tanto para mitigar os efeitos colaterais de diferentes medicamentos, quanto para diagnosticar distúrbios associados a andrógenos. O presente estudo desenvolve e valida um ensaio baseado em LC-MS/MS para a detecção de testosterona sérica total a partir de apenas (100 μL) de volume de amostra. Para aumentar a capacidade de alto rendimento do kit de diagnóstico desenvolvido para uso clínico em amostras de pacientes, o método proposto foi simplificado por meio de semiautomação em um manipulador de líquidos JANUS ^® G3 Workstation. O kit de diagnóstico proposto apresentou alta precisão de detecção (CV<5%), bem como exatidão da amostra (93%-108%), dentro de uma faixa clinicamente relevante de concentrações séricas de testosterona (5-1500 ng/dl). Além disso, o ensaio apresentou LOD de 5 ng/dl, o que é significativamente comparável a ferramentas de diagnóstico estabelecidas comercialmente. O método desenvolvido também exibiu alta linearidade sobre a faixa de soro de testosterona especificada, com uma linearidade obtida de R2>0,99 usando tanto preparação de amostra manual quanto automatizada. No geral, o trabalho mostrado apresenta um ensaio de diagnóstico de testosterona baseado em LC-MS/MS otimizado e automatizável para a avaliação de rotina dos níveis de testosterona do paciente no soro para uso clínico e em pesquisa.