Jornal de Oftalmologia Clínica e Experimental
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Abstrato

Um método de dupla coloração para distinguir vasos retinianos no modelo de retinopatia induzida por oxigénio (OIR)

Ling Xu, Ping Hu, Ye Zhang, Jinyi Long, Xue Wu, Yuhong Ye, Ning Cui, Fei Sun, Xinmin Lu, Jikui Shen, Da Long

Objectivo: O objectivo deste estudo foi melhorar um método que economiza tempo, é económico e economiza trabalho para distinguir os vasos estruturais da retina, áreas de neovascularização (NV) e de não perfusão (NP) na retinopatia induzida por oxigénio (OIR) ratos.

Métodos: Ratos C57BL/6J foram expostos a condições hiperóxicas (75% ± 2% O ₂ ) desde o dia 7 pós-natal (P7) até ao P12 e depois regressaram ao ar ambiente para provocar neovascularização retiniana máxima (NV). Depois de as Retinas terem sido isoladas aos P17, as montagens inteiras da retina foram sucessivamente coradas com Griffonia Simplicifolia Lectin (GSL) IB4-594 e GSL IB4-FITC utilizando métodos de coloração com controlo de tempo e concentração. Este método melhorado utilizou apenas dois meios de coloração e não foram necessários outros meios de bloqueio. As imagens foram adquiridas por microscopia de fluorescência e fundidas pelo Adobe Photoshop. A área de neovascularização da retina e a área de não perfusão foram medidas pelo Image-Pro Plus.

Resultados: A coloração com a concentração de GSL IB4-594 a 1:100 durante 45 minutos poderia corar quase completamente todos os tufos neovasculares, o que poderia avaliar o estado fiável e consistente da neovascularização da retina. Enquanto isso, as montagens inteiras da retina OIR foram coradas com a concentração de GSL IB4-FITC a 1:100 durante a noite, seguida de coloração GSL IB4-594, permitindo a fácil identificação e quantificação das áreas de não perfusão da retina, vasos estruturais e tufos neovasculares nos ratinhos OIR .

Conclusão: A utilização de uma coloração dupla retiniana reproduzível e quantificável para avaliar o NV e o NP no modelo OIR demonstra a importância de um método de coloração apropriado que possa calcular facilmente a proporção de NV e NP. Outros resultados, como a avaliação da eficácia anti-angiogénese de péptidos biespecíficos para a anti-angiogénese obtidos através deste método, sugerem um valor melhorado de investigação clínica e científica de que a proporção de NV e NP pode ser facilmente identificada utilizando a coloração dupla da retina.