Revista de Farmácia Aplicada
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Abstrato

Uma estabilidade quadridimensional (4D) indicando otimização de método analítico e previsão de ensaio de potência usando MS e rastreamento de pico UV

Blasko A, Tam J, Ahmad IAH, Gunasekera S, Oshchepkova I, Galin, Andrey Vazhentsev A, Tashlitsky V e Adams D

Um total de 60 picos gerados pela degradação forçada de três ingredientes farmacêuticos ativos (APIs) foram usados ​​para a seleção de colunas no desenvolvimento de um método analítico HPLC-UV de indicação de estabilidade usando rastreamento de pico LC-UV e LC-MS. Dois aditivos de fase móvel e dois modificadores orgânicos foram avaliados durante a triagem de uma lista de colunas de cromatografia cuidadosamente escolhidas. A triagem de colunas foi utilizada e a melhor coluna selecionada com base no número total de picos resolvidos, resoluções, larguras de pico e formatos de pico. 0,1% de TFA em ACN/água foi usado para a triagem inicial e otimização do perfil de gradiente. Três concentrações diferentes de TFA em ACN/água também foram avaliadas. A concentração ótima de TFA, 0,10% (8,77 mM), foi considerada ótima para otimização adicional do gradiente com base na resolução de pares críticos. Após a seleção da coluna, fase móvel e seleção do modificador de fase móvel (TFA), a otimização do gradiente foi obtida por uma combinação de rastreamento de pico quimiométrico automatizado e decisões baseadas em software no AutoChrom MS. As equações corretas de retenção de pico (ou seja, tempo de retenção vs. razão de fase móvel) foram geradas usando os primeiros gradientes de uma etapa com uma ampla faixa de % B seguidos pela otimização em gradientes de várias etapas. Foi descoberto que a extrapolação, usando modelos de retenção quadrática, pode levar a grandes erros nas previsões do tempo de retenção (tR), especialmente para componentes mal retidos. Apresentamos os desafios na resolução dos pares de resolução críticos, incluindo aqueles com o mesmo m/z, a superestimação e os erros de previsão do software, e por que o modelo de picos (ou seja, precisão do previsto versus experimental) falha nos extremos do gradiente. Usando essa abordagem, fomos capazes de gerar um método cromatográfico de indicação de estabilidade adequado para uma amostra extremamente desafiadora composta por três ingredientes farmacêuticos ativos (APIs) e produtos de degradação relacionados com uma ampla faixa de hidrofobicidade. Os APIs eram compostos internos, sua identidade é oculta neste artigo e não são relevantes para o propósito do estudo. Houve boas correspondências entre os tempos de retenção previstos e experimentais dos picos rastreados. O modelo de pico foi usado para a geração de um método de ensaio/potência usando apenas a ferramenta computacional.