Jornal de antivirais e antirretrovirais
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Abstrato

Um novo ensaio de rastreio de alto rendimento para identificar inibidores da interação da proteína gp120 do VIH-1 com DC-SIGN

Thuong H. Tran, Rasha El Baz, Andrea Cuconati, James Arthos, Pooja Jain e Zafar K. Khan

O relatório da ONUSIDA de 2010 refere que aproximadamente 34 milhões de pessoas vivem com o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (VIH-1), apesar da terapia anti-retroviral altamente activa (HAART). Apesar de ser eficaz, a terapia ARV tem muitas desvantagens, incluindo uma trajectória de custos insustentável para países com dificuldades económicas, efeitos secundários graves e o desenvolvimento de estirpes resistentes aos medicamentos. Estão em curso diversas medidas para desenvolver alternativas à terapia ARV, particularmente para o controlo da infecção precoce pelo VIH-1, mas a falta de alvos e ensaios de medicamentos eficientes dificulta a procura de potenciais moléculas ARV. As células dendríticas presentes no tecido da mucosa, juntamente com os linfócitos T CD4+ e os macrófagos, estão entre as primeiras células a encontrar o VIH-1. A molécula de não-integrina (DC-SIGN) de adesão intercelular específica das células dendríticas desempenha um papel crucial na ligação do VIH-1 através da interacção de alta afinidade com a glicoproteína gp120 do envelope viral. A DC-SIGN, uma lectina do tipo C de ligação à manose expressa nas células do tecido mucoso do reto, útero e colo do útero, facilita a infeção precoce pelo VIH-1 após a transmissão sexual. Neste estudo, reportamos um novo ensaio de rastreio de alto rendimento (HTS) específico para o alvo, capaz de quantificar a ligação, bem como a inibição de DC-SIGN e gp120. A especificidade do ensaio foi determinada através da inibição competitiva enquanto a optimização ocorreu para a tolerância ao DMSO (0,5%), factor Z’ (0,51), relação sinal-ruído (3,26) e coeficiente de variação (5, 1%). Para validação do ensaio, foram testados antagonistas previamente reconhecidos da ligação DC-SIGN/gp120 para detetar a inibição, demonstrando a adequação do ensaio para o futuro rastreio HTS de potenciais inibidores que bloqueiam a ligação entre DC-SIGN e gp120, o que pode prevenir a infecção precoce pelo VIH-1.