Espectrometria de Massa e Técnicas de Purificação
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Abstrato

Um método simples de espectrometria de massa de injeção em fluxo de diluição e injeção para quantificação de ácido glicocólico na bile humana

Raghavi Kakarla, Ramakrishna Reddy Voggu, Janet Donaldson e Baochuan Guo

Os níveis de ácido glicocólico são elevados na bile de pacientes com colangiocarcinoma, tornando-o um biomarcador potencial para a doença. A utilidade dos métodos de espectrometria de massa baseados em cromatografia líquida para a quantificação de ácido glicocólico frequentemente sofre com etapas de extração demoradas, arraste e indisponibilidade de matriz biliar em branco. Para superar os problemas, desenvolvemos um método de espectrometria de massa em tandem de injeção em fluxo de diluição e disparo (baseado em adição de padrão) para quantificação de ácido glicocólico na bile. A bile foi primeiro diluída, seguida pela adição do padrão de ácido glicocólico e do padrão interno na bile diluída, que foi então diretamente injetada em fluxo (sem separação cromatográfica) na fonte de ionização por eletrospray. A detecção foi realizada no modo de monitoramento de reação múltipla negativa com transições m/z definidas em 464,1→74,0 e 401,2→249,1 para ácido glicocólico e padrão interno, respectivamente. Uma curva de calibração de adição padrão foi construída para determinar a quantidade de ácido glicocólico presente na bile humana. O método foi validado com amostras clínicas de acordo com as diretrizes da FDA. A linearidade foi alcançada na faixa de concentração aumentada de 12,5 a 200 ng/mL com um coeficiente de correlação de 0,9857. O método tem boa exatidão, precisão, efeito de matriz mínimo e é suficientemente sensível para quantificar o ácido glicocólico mesmo após diluição de 800.000 vezes. Em conclusão, um método MS/MS de injeção em fluxo de diluição e disparo foi desenvolvido e validado pela primeira vez, o que pode ser usado na análise de rotina do ácido glicocólico na bile humana em um ambiente clínico.