Jornal de Imunologia Clínica e Celular
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Abstrato

Ativação de macrófagos alveolares com interferon-γ promove defesas antioxidantes por meio da via Nrf2-ARE

Bashar S Staitieh, Eduardo E Egea, Xian Fan1, Nnamdi Azih, Wendy Neveu e David M Guidot

O fenótipo e a função do macrófago dependem do microambiente subjacente. Muitas doenças são acompanhadas por mudanças anormais no estado de polarização do macrófago que limitam a capacidade das células de se tornarem efetores imunes inatos. Trabalhos anteriores na área sugerem que a ingestão crônica de álcool, que está associada a uma mudança de macrófagos efetores imunes inatos, também está associada a uma resposta deficiente ao estresse oxidativo. Portanto, levantamos a hipótese de que a resposta ideal ao estresse oxidativo dependia da capacidade do macrófago de se tornar uma célula efetora imune inata. Para investigar essa hipótese, primeiro confirmamos que poderíamos polarizar de forma reprodutível as células NR8383 (uma linhagem celular de macrófago alveolar de rato) nos estados prototípicos M1 e M2 (usando IFN-γ e IL-4, respectivamente). Em seguida, testamos as células polarizadas quanto à sua capacidade de eliminar espécies reativas de oxigênio geradas pela glicose oxidase (GOX) usando o ensaio Amplex red e descobrimos que as células polarizadas por IFN-γ tinham maior capacidade de eliminação. Para elucidar o mecanismo da resposta aumentada ao estresse oxidativo, nós então avaliamos os principais componentes da resposta antioxidante; especificamente, o fator nuclear (derivado de eritroide 2)-like 2 (Nrf2), o principal fator de transcrição responsável pela resposta celular ao estresse oxidativo, e um de seus efetores a jusante, a subunidade catalítica da glutamato-cisteína ligase (GCLC). Nós descobrimos que ambas as proteínas foram significativamente reguladas positivamente nas células polarizadas por IFN-γ. Para confirmar que Nrf2 é um componente integral dessa resposta antioxidante melhorada, nós transfetamos células polarizadas por IFN-γ com RNA silenciador para Nrf2 ou RNA silenciador de controle e descobrimos que a eliminação de peróxido de hidrogênio foi significativamente prejudicada nas células tratadas com si-Nrf2. Além disso, a transfecção de células não tratadas com si-Nrf2 as polarizou em direção ao fenótipo M2 na ausência de IL-4, sugerindo um papel mecanicista para Nrf2 na polarização de macrófagos. Então, confirmamos vários dos nossos principais experimentos em células primárias de macrófagos alveolares de ratos. Tomadas em conjunto, essas descobertas sugerem que o estado de polarização M1 é necessário para a resposta ótima ao estresse oxidativo no macrófago, e que essa resposta é mediada por Nrf2 e seus efetores downstream.