Jornal da Leucemia
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Abstrato

Beta-hidroxiisovalerilshikonina inibe o crescimento de células de mieloma múltiplo U266 ao desencadear a via mitocondrial

Yihui He, Xiaoyan Chen and Lingying Kong

Histórico: Beta-hidroxiisovalerilshikonina (beta-HIVS) é um composto isolado da erva medicinal oriental tradicional lithospermum radix. Este medicamento exerce um papel como um inibidor não competitivo de ATP de Proteína-Tirosina Quinases (PTKs) e mostra grande potencial para indução de apoptose contra células cancerígenas humanas. Investigamos o efeito do beta-HIVS em células U266 de mieloma múltiplo e esclarecemos detalhes do mecanismo primário em sua atividade indutora de apoptose. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi rastrear a atividade indutora de apoptose do beta-HIVS em células U266, bem como os mecanismos subjacentes. Métodos: O teste Cell Counting Kit-8 (CCK-8) e o ensaio de formação de colônias foram realizados para estimar os efeitos do beta-HIVS na viabilidade das células U266 e na formação de colônias. A análise de apoptose foi realizada com base na coloração de fluorescência DAPI e ensaios de fragmentação de DNA. A PCR em tempo real foi empregada para avaliar as alterações da expressão do mRNA de Bcl-2 e Bax, enquanto o ensaio de imunofluorescência indireta e o western blotting foram utilizados para validar a expressão de Bcl-2, Bax, caspase-3, caspase-9, PARP e citocromo c. Resultados: O teste de CCK-8 e o ensaio de formação de colônias mostraram que o tratamento com beta-HIVS resultou em proliferação celular significativamente reduzida (P<0,05 ou 0,01) e formação de colônias (P<0,01). Os resultados da PCR em tempo real indicaram que o nível de expressão do mRNA de Bcl-2 foi reduzido em 72h após o cocultivo de beta-HIVS (P<0,01), embora o mRNA de Bax tenha se alterado sem significância. O ensaio de imunofluorescência demonstrou que a caspase-3 foi ativada no grupo tratado com beta-HIVS, acompanhado por uma expressão aumentada do citocromo c. Western blotting também demonstrou que a expressão da proteína Bcl-2 no grupo tratado com beta-HIVS diminuiu e o citocromo c aumentou em 72h após o co-cultivo. Além disso, caspase-3 e -9, bem como PARP foram ativados, todos com P<0,01 quando comparados com os dois grupos de controle. Conclusão: Beta-HIVS revelou notável atividade indutora de apoptose em células U266, possivelmente pela inibição da proliferação e promoção da apoptose via via mitocondrial.