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Abstrato

Caracterização e Análise da Expressão dos Genes da Chalcona Sintase (CHS) e da Antocianidina Sintase (ANS) em Clivia miniata

Achilonu C Conrad e Maleka F Mathabatha

A chalcona sintase (CHS) e a antocianidina sintase (ANS) estão entre as principais enzimas responsáveis ​​pela produção de antocianinas nas plantas. São geralmente codificados por famílias multigénicas, sendo que alguns membros dessas famílias contribuem para a pigmentação da cor. O estudo examinou os genes CHS e ANS em Clivia miniata; cujos tecidos floridos sofrem alterações de cor. O RNA para o cDNA foi isolado a partir de tecidos florais e três unigene(s) (CmiCHS 11996, CmiCHS 43839 e CmiANS) de sequências curtas foram inicialmente obtidos utilizando uma técnica de sequenciação de nova geração. Os primers específicos do gene foram desenhados a partir das sequências curtas iniciais não publicadas de CHS e ANS. O comprimento do cDNA amplificado após PCR foi CmiCHS 11996 (933 pb), CmiCHS 43839 (951 pb) e CmiANS (983 pb). O início traduziu o quadro ORF correspondente à proteína prevista de proteína deduzida de 390 aminoácidos (AEN04070) para genes CHS, e previu 355 aminoácidos em relação ao gene ANS (AGD99672). A análise in silico revelou que o peso molecular calculado e o ponto isoeléctrico teórico (pI) CmiCHS 11996 e CmiCHS43839 foram de 31,0 kDa - 6,95 e 34,6 kDa - 7,54 respectivamente. Os motivos importantes do sítio de ligação do produto e do sítio activo foram identificados com sucesso a partir das sequências de aminoácidos deduzidas. O alinhamento de sequências múltiplas mostrou que as sequências CmiCHS e CmiANS eram altamente conservadas e partilhavam uma elevada identidade de sequência (> 83%) com as chalcona sintases de outras plantas. No entanto, foi realizado um outro ensaio para determinar os perfis de expressão destes genes em diferentes tecidos e também nas tépalas (flor laranja e amarela) utilizando a PCR quantitativa em tempo real. Os níveis de expressão de CmiCHS e CmiANS foram mais elevados nas tépalas em comparação com os restantes tecidos (folhas, estilete e estigma e escapo). Estes padrões de expressão dos genes nos tecidos correspondiam à acumulação de antocianina, sugerindo que os pigmentos de cor laranja e amarelo estavam certamente relacionados com a regulação da chalcona sintase e da antocianina sintase.