Revista de Farmácia Aplicada
Acesso livre
ISSN: 1920-4159
ISSN: 1920-4159
Zhangming Xie, Shabbir Ahmed, Wenhui Liu, Sisi Kong, Yingchun Xu, Ting Liu e Shuqing Chen
O citocromo P450 3A4 humano (CYP3A4) é a enzima metabolizadora de fármacos de fase I mais abundante no fígado, e aproximadamente 50% dos fármacos no mercado são metabolizados pelo CYP3A4. Portanto, muitos estudos in vitro confiaram no CYP3A4 recombinante como ferramenta de triagem para avaliar potenciais interações medicamentosas (DDIs) in vivo. No entanto, informações limitadas sobre o CYP3A4 recombinante com alta atividade catalítica estão disponíveis. Portanto, o presente estudo teve como objetivo obter o CYP3A4 recombinante com alta atividade catalítica e caracterizar suas funções in vitro. Para aumentar as atividades catalíticas do CYP3A4 expresso de forma heteróloga, a enzima foi fundida ao citocromo b5 (b5) cauda a cabeça, e a enzima fundida foi inserida junto com a NADPH–P450 redutase (POR) em um único plasmídeo para atingir uma expressão simultânea em células sf9. Aqui, afinidades de ligação ao substrato, atividades enzimáticas e aplicações em DDIs in vitro da enzima fundida foram investigadas. A constante de dissociação Kd de POR-cyt b5CYP3A4 foi de 8,3 ± 0,87 μmol/L, o Clint (Clint=Vmax/Km) foi de 8,57 mL/min/g de proteína para POR-cyt b5CYP3A4 no metabolismo da testosterona e 150,3 mL/min/g de proteína para midazolam. Além disso, a constante inibitória Ki do cetoconazol no metabolismo da testosterona foi de 0,013 ± 0,0038 μmol/L. Os resultados presentes sugeriram aumento significativo da afinidade de ligação do substrato e da atividade enzimática para a enzima fundida. Assim, o construto pode ser útil para estudar metabolismos de fármacos e investigação de DDIs associados ao CYP3A4 in vitro. Além disso, a expressão simultânea da enzima fundida e POR pode fornecer resultados mais reprodutíveis com base em uma razão molar mais estável de CYP3A4/POR/b5.