Jornal de Oftalmologia Clínica e Experimental
Acesso livre

Abstrato

Expressão génica controlável da uroquinase em células da malha trabecular

Mei Tsuda, Shiho Kaneko, Akira Ando, ​​​​Tetsuya Nishimura, Emiko Okuda-Ashitaka, Seiji Ito, Makoto Taomoto, Miyo Matsumura e Kanji Takahashi

Objectivo: O glaucoma é um tipo de neuropatia óptica progressiva que leva, finalmente, à cegueira relacionada com a pressão intraocular (PIO) elevada. A acumulação de matriz extracelular na malha trabecular (TM) e nos tecidos conjuntivos justacanaliculares, que formam uma via de saída aquosa, pode ser uma das principais causas do aumento da PIO, pelo que o sistema fibrinolítico pode estar associado à regulação da PIO. Examinámos a possibilidade de transferência controlável do gene do ativador do plasminogénio da uroquinase (uPA) para as células TM.
Métodos: As células TM foram recentemente isoladas a partir de olhos de porco e as células TM humanas obtidas durante procedimentos de trabeculectomia e cultivadas. O RNA total foi extraído de células TM humanas e transcrito inversamente para cDNA. Foi então realizado um método de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR) para detetar a expressão génica de uPA. O ADNc do uPA humano foi subclonado num vector de expressão (vector pEYFP-N1) e num vector de expressão controlável (vector TRE-Tight), depois cada vector foi transfectado independentemente em células TM de porco cultivadas. A doxiciclina foi adicionada ao meio de cultura para ativar os vetores pTet-ON e TRE-Tight. Por fim, a expressão de uPA foi examinada através de um ensaio imunoenzimático (ELISA).
Resultados: Os resultados do ELISA revelaram a expressão de uPA (3,5 ng/ml) em meio de cultura de células TM suínas que foram transfectadas com o gene uPA humano utilizando o vector pEYFP-N1. A doxiciclina induziu uPA humano nos vectores pTet-On e TRE-Tight com células TM co-transfectadas com o gene uPA humano de uma forma dose-dependente.
Conclusões: A transferência controlável de genes de uPA, que pode degradar a matriz extracelular no tecido conjuntivo justacanalicular, para as células TM foi conseguida utilizando um sistema Tet-On. O presente método pode ser útil como nova terapêutica para o glaucoma.