HIV: pesquisa atual
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Abstrato

Cytoplasmic Distribution of HIV-1 Tat Sensitizes Jurkat T cells to Sulphamethoxazole-Hydroxylamine Induced Toxicity

Kemi Adeyanju, Gregory A. Dekaban and Michael J. Rieder

Fundamento: Um medicamento habitualmente utilizado por indivíduos infectados pelo VIH-1 é o antimicrobiano sulfametoxazol (SMX), utilizado no tratamento e profilaxia da pneumonia por pneumocystis. No entanto, o SMX é responsável por uma incidência muito elevada de reações adversas a medicamentos (RAMs) de hipersensibilidade na população VIH-1. Embora a fisiopatologia das RAM em geral seja desconhecida, as RAM mediadas pelo sulfametoxazol têm sido associadas ao seu metabolito reativo sulfametoxazol-hidroxilamina (SMX-HA). O nosso trabalho anterior mostrou que o aumento da expressão da proteína Tat do VIH-1 nas células T correlacionou-se com o aumento da apoptose após incubação com SMX-HA. Neste estudo procurou-se determinar a região da proteína Tat responsável por este efeito e o mecanismo pelo qual a Tat contribuiu para a apoptose mediada por SMX-HA.
Métodos: Estabelecemos linhas celulares Jurkat T e Cos 7 que expressavam estavelmente Tat de comprimento total (Tat101) e mutantes de deleção (Tat86, Tat72, Tat48 e TatΔ). Estas linhas celulares foram depois incubadas com SMX-HA e testadas quanto à viabilidade celular e produção de espécies reativas de oxigénio (ROS). Utilizámos ainda a microscopia confocal para avaliar a distribuição intracelular das proteínas Tat e para determinar se as alterações na expressão e / ou localização das principais proteínas do citoesqueleto contribuíram para a apoptose mediada por Tat após tratamento com SMX-HA.
Resultados: A deleção das regiões de Tat que levam ao aumento da acumulação citoplasmática contribuiu significativamente para o aumento da morte celular na presença de SMX-HA. O aumento da morte celular não necessitou de indução de ERO. A análise quantitativa mostrou também que as linhas celulares que expressam Tat tinham níveis significativamente mais baixos de β-actina e α-tubulina presentes antes e depois do tratamento com SMX-HA. O aumento da localização citoplasmática da Tat correlacionou-se com maiores perturbações na distribuição dos filamentos de actina.
Conclusão: A presença de Tat citoplasmática em linhagens celulares T e epiteliais aumenta a sua sensibilidade à morte celular induzida por SMX-HA, efeito mediado pelos primeiros 48 aminoácidos da TAT.