Jornal de Ciência e Terapia Celular
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Abstrato

Desenho e caracterização molecular da construção do transgene C-Kit durante a espermatogénese em ratinhos

Swanand Koli, Arun P Sikarwar, Murali R Babu and Reddy KVR

No testículo pós-natal, as células estaminais espermatogoniais tipo A indiferenciadas (SSCs) diferenciam-se em células espermatogoniais tipo B (SGCs) na presença de c-Kit, que é expresso de forma específica de célula/estágio durante a espermatogénese em mamíferos. O c-Kit é submetido a um controlo transcricional rigoroso, uma vez que é essencial não só para as células germinativas, mas também para o desenvolvimento das células estaminais hematopoiéticas e dos melanócitos. Embora a expressão de c-Kit seja um processo regulado dinamicamente, a base molecular para a sua regulação transcricional durante a espermatogénese permanece em grande parte não identificada. O objetivo do estudo é determinar se a introdução ou não da construção do transgene que expressa c-Kit em SSCs negativos para c-Kit isolados de ratinhos mutantes Wv/Wv se irá diferenciar e colonizar nos testículos dos ratinhos recetores. Para este efeito, foi desenhada uma construção de transgene pG1-Kit-ORF-GFP de 7,4 kb que contém uma cassete de expressão c-Kit-ORFGFP de 4,4 kb e a sua expressão in vitro foi confirmada por análise de imunofluorescência e citometria de fluxo. Para comparação dos resultados, foram utilizadas três construções de controlo-GFP, tendo 1,1 kb (sem promotor c-Kit e ORF), 4,1 kb (sem promotor c-Kit) e 1,4 kb (sem c-kit-ORF ) foram também desenhados e introduzidos em SSCs por eletroporação (EP). Estes SSC foram introduzidos nos testículos de ratinhos inférteis recetores tratados com bussulfano via rete, utilizando a abordagem de Transplante de Células Germinativas (GCT). Observou-se que os SSCs portadores da inserção do transgene c-Kit-ORF-GFP foram capazes de colonizar e diferenciar-se noutras linhagens de células germinativas nos túbulos seminíferos dos ratinhos recetores em comparação com os controlos. Em conclusão, os ratinhos Wv/Wv mutantes testiculares têm a população de SSCs, em que a função da sinalização de c-Kit é prejudicada pela primeira vez, relatamos que a função das SSCs nos ratinhos inférteis recetores poderia ser retomada com a introdução de c -Kit Inserção de transgene -ORF-GFP. Assim, os presentes achados podem ter um impacto significativo na compreensão da fisiologia reprodutiva e no potencial para novas terapias futuras em doentes com insuficiência testicular.