Jornal de Oftalmologia Clínica e Experimental
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Abstrato

Diferenciação de células estaminais derivadas do tecido adiposo humano ao longo da linhagem de ceratócitos in vitro

Shijia Zhang, Ladan Espandar, Kathleen MP Imhof e Bruce A. Bunnell

Objectivo: Avaliar a diferenciação de células estaminais derivadas do tecido adiposo humano (hASCs) com a linhagem de ceratócitos por co-cultura com ceratócitos primários in vitro .
Materiais e Métodos: Foi desenvolvido um sistema de co-cultura utilizando inserções transwell para cultivar hASCs na parte inferior e ceratócitos na parte superior em meio de diferenciação de ceratócitos (KDM). As hASCs que foram cultivadas em meio de cultura completo (CCM) e KDM foram utilizadas como controlo. Após 16 dias, as hASCs foram examinadas quanto a alterações morfológicas e proliferação por contagem celular. A qRT-PCR e a citometria de fluxo foram utilizadas para detetar a expressão da família aldeído desidrogenase 3, membro A1 (ALDH3A1) e ceratocano.
Resultados: os hASCs tornaram-se mais dendríticos e alongados no sistema de co-cultura em relação ao CCM e KDM. O tempo de duplicação das células foi maior à medida que a diferenciação progrediu. A qRT-PCR mostrou uma tendência definitiva para o aumento da expressão de ALDH3A1 e ceratocano no sistema de co-cultura, apesar dos valores de p estatisticamente não significativos. A citometria de fluxo mostrou níveis proteicos significativamente aumentados de ALDH3A1 e ceratocano no sistema de co-cultura em relação ao grupo CCM (p<0,001) e mesmo em relação ao grupo KDM (p<0,001 para ALDH3A1 e p<0,01 para ceratocan).
Conclusão: O método de co-cultura é uma abordagem promissora para induzir a diferenciação de populações de células estaminais antes das aplicações in vivo. Este estudo revela um importante potencial para a bioengenharia do tecido da córnea utilizando células estaminais autólogas multipotenciais.