Avanços em Engenharia Genética
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Abstrato

Engenharia de uma lipase rumo à termoestabilidade: estudos sobre o efeito aditivo das duas mutações termoestabilizadoras na superfície da proteína

Rakesh K, Nisha C, Ranvir S, Pushpender KS, Jagdeep K*

Neste estudo, mostramos o efeito combinado de duas mutações pontuais S311C (LipR2) e R214C (LipR3) na estabilidade da proteína e na alteração global das propriedades bioquímicas. Verificámos que ambas as mutações estão próximas da superfície e aumentam individualmente a estabilidade térmica da proteína (T1/2 para S311C=4,5 h e R214C=7 h a 60°C). Mas, o seu efeito combinado não foi aditivo na termoestabilidade. O T1/2 do duplo mutante (LipR2 + LipR3) foi de 4 horas a 60ºC. Estudos de dicroísmo circular (CD) e fluorescência também apoiaram as nossas descobertas. Estudos de modelação por homologia demonstraram que no duplo mutante (LipR4) a cadeia lateral da Cys311 se projeta para o solvente a granel e está facilmente disponível para a oxidação do grupo sulfaidril. Esta pode ser a razão da sua baixa termoestabilidade em comparação com o LipR3. Observámos também que as cadeias laterais do Cys 214 não se alteraram. Aqui, uma das cisteínas (Cys311) comporta-se como um resíduo hidrófilo, enquanto a outra (Cys 214) se comporta como um resíduo hidrófobo.

Palavras-chave:

lipase; Termoestabilidade; Mutações; Enzima; Sequência de nucleótidos

Introdução