Revista de Métodos de Diagnóstico Médico
Acesso livre

Abstrato

Avaliação da integridade do RNA extraído por material de referência de RNA

Junko Takahashi, Akiko Takatsu e Hitoshi Iwahashi

A informação fisiológica identificada a partir do nível de expressão de RNA em tecidos ou órgãos traz-nos benefícios no diagnóstico clínico. Após a extração do RNA do sangue, tecido ou órgãos, o diagnóstico foi realizado através de uma técnica de estimativa semiquantitativa de mRNA específico, como PCR em tempo real ou microarranjos de ADN. A validação da qualidade do RNA necessita de uma estimativa quantitativa da expressão génica no momento da amostragem, uma vez que a utilização de RNA degradado levará a resultados incorretos. Neste estudo, conduzimos uma série de experiências para avaliar a integridade do RNA utilizando os materiais de referência de comprimento de RNA de 1000 pares de bases (refRNA1000) e comparámos com o RIN. Existe uma correlação significativa entre o RIN e a quantidade de refRNA1000, em vários estados de degradação. Existem também correlações significativas entre a quantidade de refRNA1000 e genes endógenos como Actb e Rps18 em vários estados de degradação no nosso estudo. A quantidade de gene endógeno reflete a extensão da degradação mais diretamente do que a do RIN. Para monitorizar a extensão da degradação desde o ponto de partida experimental, podemos referir os materiais de referência do refRNA1000. Não só para diagnóstico clínico, mas os cientistas exigem sempre a validade do procedimento experimental, um dos métodos candidatos é utilizar materiais de referência de RNA como o refRNA1000