Medicina Interna: Acesso Aberto
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Abstrato

Tipagem molecular usando PCR-RFLP revela diversidade de micobactérias ambientais agentes da úlcera de Buruli na Costa do Marfim, Costa do Marfim (África Ocidental).

Quinet Gregoire, Kakou Ngazoa E Solange, Aka Nguetta, Vakou Sabine, Coulibaly Ngolo David, Kouakou Helene, Sylla Aboubacar, Faye-Kette Hortense, Aoussi Serge, Dosso Mireille

A úlcera de Buruli é uma doença de pele negligenciada causada por Mycobacterium ulcerans (MU) e afeta 1.000 pessoas a cada ano no mundo todo, especialmente em países africanos. A erradicação da úlcera de Buruli é difícil devido à falta de diagnóstico precoce em regiões rurais endêmicas e ao desconhecimento da doença no sistema nacional de saúde. Nas zonas úmidas e pântanos rurais da África Central e Ocidental, as crianças são as mais afetadas. A MU pertence às micobactérias produtoras de micolactonas ambientais (MPMs) e apresenta alta diversidade genética das cepas circulantes. Os diagnósticos foram aplicados por cultura e detecção do genoma por reação em cadeia da polimerase (PCR). A PCR se tornou um método ouro para confirmar amostras clínicas e ambientais para MU. O método MIRU-VNTR e o polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP) combinados com marcadores MIRU-VNTR foram usados ​​para discriminar micobactérias de diferentes fontes. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade molecular de diferentes fontes de micobactérias, do ambiente, cepas de cultura e amostras clínicas usando MIRU-VNTRTyping e RFLP combinados. Um total de 26 amostras (água, sedimento, cepas de micobactérias e swab) de locais endêmicos foram primeiramente confirmadas por coloração IS2404 ou Ziehl-Neelsen. As amostras foram analisadas por tipagem de PCR para 4 marcadores específicos (MIRU-1, VNTR6, VNTR19, ST-1) e os amplicons foram digeridos com endonuclease de restrição MspI e separados por eletroforese em gel de agarose a 3% para análise de PCR-RFLP. Nossos resultados mostraram amplificação diferente por tipagem VNTR-MIRU. Para amostras ambientais, uma baixa amplificação foi detectada em 25% para PCR-MIRU-1. As cepas de cultura e amostras clínicas tiveram taxa de amplificação de 35,7% e 62,5%, respectivamente. ST-1 teve o melhor marcador amplificado para cepas de cultura em 71,4%, enquanto amostras clínicas tiveram boa taxa de amplificação em 62,5% para todos os marcadores. Os perfis de PCR-RFLP de amostras clínicas foram idênticos, enquanto cepas ambientais e de micobactérias mostraram diferentes perfis de PCR-RFLP. Desenvolvemos uma abordagem sensível, mais fácil e barata de PCR-RFLP para confirmar a genotipagem de micobactérias não tuberculosas em países endêmicos para triagem ambiental. Sugerimos mutação em loci repetidos da sequência VNTR-MIRU e a adaptação de micobactérias do ambiente para o ser humano. Este estudo confirma a circulação de vários genótipos de micobactérias na Costa do Marfim.