Jornal de Ciência e Terapia Celular
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Abstrato

Transplante não mieloablativo de células estaminais de medula óssea para terapia de miodistrofia em ratinhos mdx

VM Mikhailov, AV Sokolova, VV Kravtsova, VV Zenin, EV Kaminskaya, NA Timonine e II Krivoi

Enquadramento: Ratos Mdx são modelo experimental de doença monogénica humana sem cura Distrofia Muscular de Duchenne (DMD). A esperança de cura está associada ao uso da terapia com células estaminais em particular, mas não exclusivamente. A análise de vários resultados experimentais mostra que o transplante intramuscular de diferentes tipos de células de diferentes origens com propriedades de células estaminais não consegue converter fibras musculares estriadas mutantes (SMF) em SMF de tipo selvagem. Concluiu-se que apenas a substituição da medula óssea mutante (BM) por células BM do tipo selvagem pode converter o SMF mutante em SMF do tipo selvagem. Infelizmente, a irradiação de raios X de ratinhos mdx numa dose letal de 11, 7 ou 5 Gy seguida de transplante de células BM de ratinhos C57BL/6 de tipo selvagem não aumentou a síntese de distrofina SMF. O objetivo deste estudo foi analisar a síntese de distrofina em músculos estriados de ratinhos mdx após irradiação de raios X com uma dose de 3 Gy seguida de transplante de células de medula óssea C57BL/6. Também investigámos a reparação da estrutura das fibras musculares do diafragma dos JNMs. Para confirmar o significado funcional das alterações estruturais observadas nas JNMs, foi também realizada uma investigação do potencial de membrana em repouso das JNMs das fibras musculares do diafragma. Métodos: Ratos mdx com 1 a 1,5 meses de idade foram irradiados por raios X na dose de 3 Gy. No dia seguinte, as células da MO recentemente preparadas foram injectadas por via intravenosa numa quantidade de (15-20) x 106 células por ratinho. Os animais foram estudados durante 2, 4 e 6 meses após o transplante. Cada grupo experimental de ratos incluiu 3-8 animais. Mus. As fibras musculares do quadríceps femoral e do diafragma com as suas junções nervo-musculares (JNMs) estavam sob investigação. Para o registo do quimerismo, foi realizado um estudo especial utilizando o transplante de células BM C57BL / 6 positivas para GFP em ratinhos mdx após irradiação de 3 Gy. Ao longo de 6 meses, as células da MO foram separadas dos ossos longos e foram preparados esfregaços. Após a fixação do carbinol, os esfregaços foram corados com iodeto de propídio e estudados no microscópio confocal LSM 5 Pascal (Carl Zeiss, Alemanha) para contar a parte das células positivas para GFP em relação à quantidade total de células nucleares. Resultados: Observámos um crescimento estável da síntese de distrofina após irradiação não letal de raios X na dose de 3 Gy. A parte do SMF positivo para distrofina de M. quadriceps femoris aumentou de 1% para 4% (2 meses), 12% (4 meses) e 27% (6 meses) após o transplante. O crescimento da síntese de distrofina foi acompanhado pela diminuição do nível de morte do SMF, pelo aumento de parte do SMF sem nuclear central até 22%, pela acumulação de ramos do MNJ e pela reparação dos potenciais de membrana em repouso. A parte de células positivas para GFP entre todas as células com núcleo nos esfregaços de MO de ratinhos mdx quiméricos transplantados com GFP aos 6 meses após o transplante foi de 3,3 ± 0,8%, o que mostra a natureza quimérica dos ratinhos. Conclusão: O transplante não mieloablativo de células de medula óssea de ratinhos mdx após irradiação de raios X 3 Gy é acompanhado pela formação de quimerismo,crescimento estável da síntese de distrofina e reparação da estrutura e função das JNMs.