Jornal de antivirais e antirretrovirais
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Abstrato

Novas mutações rtM204 na polimerase do VHB conferem uma suscetibilidade reduzida ao adefovir e ao tenofovir

Ke Zhang, Christian Bach, Maria Neumann-Fraune, Yuchen Xia, Bastian Beggel, Rolf Kaiser, Verena Schildgen, Andrea Krämer, Oliver Schildgen e Ulrike Protzer

Enquadramento: O tratamento da infecção crónica pelo VHB é limitado pela selecção da resistência. As mutações rtM204I/V no motivo YMDD da transcriptase reversa do VHB são determinantes de resistência bem documentados contra a lamivudina e o entecavir, mas não contra o adefovir ou o tenofovir. Estão disponíveis dados fenotípicos sistemáticos limitados para os dois últimos medicamentos.

Métodos: as mutações rtM204 (rtM204A/I/K/L/Q/S/T/V) foram sistematicamente introduzidas em construções de comprimento de HBV 1,1 vezes competentes para replicação sob o controlo de um promotor de CMV. A aptidão para a replicação viral foi determinada por qPCR seletivo após transfeção transitória normalizada. As susceptibilidades aos medicamentos in vitro foram avaliadas através da determinação dos valores IC50 de lamividuna, entecavir, adefovir e tenofovir utilizando ensaios fenotípicos padronizados de alto rendimento. A infectividade foi analisada por infecção de células HepaRG.

Resultados: A fenotipagem in vitro mostrou que o rtM204K conferiu resistência de alto nível ao adefovir e ao tenofovir, mas simultaneamente prejudicou a capacidade de replicação. A sua aptidão não pôde ser restaurada por rtL180M ou rtL80I como descrito para rtM204I/V. O rtM204L e o rtM204Q conferiram uma suscetibilidade reduzida de baixo nível ao adefovir/tenofovir sem perda da capacidade de replicação. O rtM204A/I/S/T reduziu substancialmente a suscetibilidade a qualquer um dos fármacos. Curiosamente, a mutação única rtM204V mostrou uma suscetibilidade significativamente reduzida a ambos os medicamentos, mas perdeu resistência em combinação com a mutação compensatória rtL180M. Ao afectar o gene S sobreposto, os mutantes rtM204, excepto o rtM204L, apresentaram uma infecciosidade reduzida ou diminuída nas células HepaRG.

Conclusões: Estabelecemos um ensaio fenotípico com uma boa relação custo-benefício e identificámos novas mutações rtM204 que conferem resistência cruzada ao adefovir e ao tenofovir in vitro. Apesar da sua baixa frequência na população viral, o seu significado clínico não deve ser subestimado devido à potencial seleção de mutações compensatórias, que podem restaurar a aptidão viral.