Jornal de Ciência e Terapia Celular
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Abstrato

A nucleolina transporta a Hsp72 para a membrana plasmática preparatória para a sua libertação no microambiente

Appukuttan NR Pradeep, Alexzander Asea e Punit Kaur

Objectivo: Os nossos estudos anteriores demonstraram que o stress térmico induz a libertação de Hsp72 das células por um mecanismo independente da via clássica de transporte de proteínas. No entanto, o mecanismo exato pelo qual a Hsp72, uma proteína sem líder, ganha acesso ao meio extracelular permanece desconhecido. Materiais e métodos: Este estudo foi desenvolvido para determinar o mecanismo pelo qual ocorre o tráfego e a libertação intracelular de Hsp72. Os dados apresentados neste estudo sugerem o tráfego intracelular da Hsp72 utilizando Western blotting e citometria de fluxo. Além disso, foram identificadas proteínas desconhecidas ligadas à membrana, fazendo digestão em gel e LC-MS/MS. Resultados: Demonstramos que no espaço de 60 minutos após a primeira exposição das células ao tratamento de choque térmico, a Hsp72 ligada à membrana plasmática é eliminada e redistribuída em compartimentos citosólicos. A inibição do transporte celular ativo pelo pré-tratamento das células com citocalasina B anulou completamente a redistribuição da Hsp72 da membrana plasmática para o citosol. A ligação cruzada de proteínas ligadas à membrana plasmática com Hsp72 seguida de análise Western blot e análise LC-MS/MS revelou pelo menos sete parceiros de interação com Hsp72, incluindo nucleolina, Hsp90, gp96, CAP2, TLR2, 4 e 7. Transfeção de células com nucleolina-siRNA inibiu completamente a libertação de Hsp72 induzida por choque térmico e basal. Conclusões: Em conjunto, este estudo demonstra pela primeira vez que a membrana plasmática atua como um reservatório para a Hsp72 e sugere que a nucleolina desempenha um papel importante no tráfego e libertação da Hsp72.