ISSN: 2471-9315
Pintubala Kshetri, Oscar Ningombam and Debananda S. Ningthoujam
Objetivo: Isolamento de bactérias alcalinofílicas produtoras de protease alcalina e otimização da produção de protease em meio de baixo custo.
Métodos: A otimização da produção de protease foi realizada pela abordagem de uma variável por vez (OVAAT) e abordagens estatísticas usando o software Design Expert 6.
Resultados: Nove (9) cepas bacterianas alcalifílicas morfologicamente distintas foram isoladas. Destes isolados, 6 cepas foram consideradas positivas para produção de protease. Entre essas cepas proteolíticas, Bacillus sp. KW2 foi selecionado para estudos de otimização da produção de protease. A produção ótima de protease foi observada a 30°C e pH 10,7. Entre as várias fontes de carbono e nitrogênio estudadas, farelo de arroz e farelo de soja foram consideradas as melhores fontes de carbono e nitrogênio, respectivamente. O delineamento Plackett-Burman (PBD) foi usado para rastrear fatores de sinal que influenciaram a produção de protease. Farelo de arroz, farelo de soja, idade do inóculo, CaCl2 e tamanho do inóculo deram efeitos positivos , enquanto KH2PO4 e MgSO4 deram efeitos negativos na produção de protease. Os quatro fatores mais críticos, a saber, farelo de arroz, farelo de soja, cloreto de cálcio e di-hidrogenofosfato de potássio, foram selecionados para estudos de otimização pela Metodologia de Superfície de Resposta (RSM). Os gráficos de superfície de resposta mostraram interações significativas entre os fatores e um meio otimizado final (FOM) foi obtido após experimentos de PBD e RSM. No geral, um aumento de 4,8 vezes na produção de protease foi observado após a otimização. Estudos do curso temporal da produção de protease por Bacillus sp. KW2 revelaram que a produção máxima de protease ocorreu na fase estacionária (84 h) de crescimento.
Conclusões: O presente estudo mostra que a produção de protease é grandemente influenciada pelas condições culturais e constituintes do meio. Este estudo também estabeleceu que a cepa KW2 poderia produzir protease alcalina em um meio de baixo custo contendo farelo de arroz e farelo de soja como principais fontes de carbono e nitrogênio. KW2 e sua protease podem ser agentes promissores para aplicações biotecnológicas.