Jornal de Imunologia Clínica e Celular
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Abstrato

Análise quantitativa da proteína de choque térmico lipossomal 70 (Hsp70) no sangue de pacientes com tumor usando um novo ELISA LipHsp70

Stephanie Breuninger, Janina Erl, Clemens Knape, Sophie Gunther, Ivonne Regel, Franz Rödel, Udo S Gaipl, Jun Thorsteinsdottir, Lydia Giannitrapani, Anne M Dickinson e Gabriele Multhoff

Níveis elevados da proteína de choque térmico induzível por estresse 70 (Hsp70) na circulação periférica foram relatados para muitas entidades tumorais. Em linha com essas descobertas, mostramos que as células tumorais positivas para membrana Hsp70 liberam ativamente Hsp70 em vesículas lipídicas semelhantes a exossomos. Como a maioria dos ensaios imunoenzimáticos (ELISAs) comerciais de Hsp70 não são validados para a detecção de Hsp70 lipossomal no soro, o ELISA lipHsp70 foi estabelecido usando o anticorpo monoclonal cmHsp70.1 como reagente de detecção. Foi relatado que esse anticorpo reconhece Hsp70 livre e ligado à membrana em células tumorais vivas.
A validação do ELISA mostrou uma alta precisão e linearidade do ensaio em uma faixa de concentração de 0,36-17,4 ng/ml. Uma comparação da recuperação de Hsp70 enriquecida em amostras de tampão e soro revelou uma recuperação significativamente melhor usando o ELISA lipHsp70 em comparação com um ELISA comercial. Com relação à Hsp70 associada a lipídios, uma recuperação dez vezes maior foi encontrada com o ELISA lipHsp70 em comparação ao ELISA comercial. A análise de amostras de sangue de voluntários humanos saudáveis ​​(n=114) revelou uma concentração sérica média de Hsp70 de 6,4 ± 2,7 e 2,8 ± 1,3 ng/ml, respectivamente, usando o lipHsp70 e o ELISA de controle. Não foram detectadas diferenças significativas relacionadas à idade nos níveis séricos de Hsp70. O ELISA lipHsp70 é igualmente adequado para soro e plasma e as concentrações medidas de Hsp70 não foram impactadas pela ingestão de alimentos, congelamento e descongelamento repetidos da amostra ou hemólise moderada. Uma comparação dos níveis de Hsp70 em pacientes com câncer de cabeça e pescoço, pulmão, colorretal, pancreático, glioblastoma ou malignidades hematológicas e voluntários humanos saudáveis ​​revelou níveis significativamente mais altos em pacientes com tumor.
Em resumo, o ELISA lipHsp70 fornece um método altamente sensível e robusto para medir Hsp70 lipossomal e livre em soro e plasma e, portanto, pode fornecer uma ferramenta útil para detecção de tumores e para monitorar o resultado clínico de pacientes.