Jornal de Imunologia Clínica e Celular
Acesso livre

Abstrato

Expressão estável e caracterização de um receptor de manose otimizado

David J Vigerust, Sherell Vick e Virginia L Shepherd

O receptor de manose (MR) é um receptor de superfície de macrófago que reconhece padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) de uma gama diversificada de patógenos bacterianos, fúngicos e virais. Estudos funcionais do MR são dificultados pela escassez de linhagens celulares humanas que expressam o receptor. Os sistemas de modelos atuais disponíveis para o estudo da biologia do MR frequentemente demonstram baixos níveis de expressão e não retêm muitas das propriedades clássicas do MR. Embora vários laboratórios tenham relatado expressão transitória e estável do MR a partir de plasmídeos, dados preliminares do nosso laboratório sugerem que esses plasmídeos produzem uma proteína que não possui domínios críticos e frequentemente não é estável ao longo do tempo. Neste relatório atual, descrevemos a geração e caracterização de um novo sistema humano otimizado por códons para expressão transitória e estável de MR. Códons e sequências raros que contribuem para a instabilidade do mRNA foram modificados para produzir mRNA que é qualitativa e quantitativamente melhorado. A imagem confocal do receptor otimizado expresso transitório e estável demonstra uma distribuição consistente com relatórios anteriores. Para demonstrar as características funcionais do receptor otimizado, mostramos ainda que a introdução do plasmídeo MR otimizado por códon pode conferir fagocitose associada a MR de S. aureus a células HeLa não fagocíticas. Mostramos que três moléculas participam do engajamento e internalização de S. aureus . Foi descoberto que MR colocaliza-se com o receptor Toll-like 2 (TLR2) e Rab5 após exposição a S. aureus corado com pHrodo , sugerindo cooperação entre as três moléculas para engajar e internalizar a partícula bacteriana. Este estudo descreve um receptor MR otimizado, capaz de transfecção, com características funcionais semelhantes ao receptor do tipo selvagem e demonstra ainda um novo sistema para o estudo contínuo da biologia e função de MR.