Jornal de Oftalmologia Clínica e Experimental
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Abstrato

Estandardização do isolamento de células endoteliais da córnea humana e da utilização de membrana amniótica humana desnudada como estrutura para as células endoteliais da córnea humana

Kalpana Suresh, Alan Mathew Punnoose, Sarah Kuruvilla e Tanvi Khanna

Objectivos: Uniformizar o isolamento de células endoteliais da córnea humana (HCECs) e utilizar a membrana amniótica humana desnudada (HAM) como suporte para HCECs isolados.
Métodos: A membrana amniótica humana foi desnudada utilizando 1,2 unidades/ml de Dispase II a 37°C durante 60 minutos seguido de raspagem mecânica. As folhas endoteliais da córnea e da membrana de Descemet foram retiradas de olhos cadavéricos de dadores humanos impróprios para uso cirúrgico e digeridas enzimaticamente com 2 mg/ml de solução de colagenase II a 37°C e 5% de CO2 durante 2 horas. As células isoladas foram ressuspendidas em meio de cultura com suplementos e plaqueadas em recipientes de cultura não revestidos durante quatro horas para eliminar os fibroblastos que aderem mais rapidamente do que as células endoteliais. Após o pré-plaqueamento, as células não aderentes foram semeadas em placas revestidas de gelatina ou em membrana amniótica desnudada em meio OptiMEM suplementado com factores de crescimento. As células foram analisadas por microscopia quanto à aderência e morfologia poligonal.
Resultados: A microscopia da membrana amniótica desnudada não mostrou restos de células epiteliais. A digestão enzimática da córnea deixou para trás as folhas acelulares de Descemet com as células endoteliais a flutuar individualmente ou em grupos com pré-plaqueamento a auxiliar no isolamento das células endoteliais mais livres de fibroblastos. Poucas células isoladas conseguiram formar uma estrutura na membrana amniótica e reter essa adesão durante as subsequentes substituições dos meios.
Conclusão: O tratamento prolongado da HAM utilizando a enzima suave Dispase-II resulta no desnudamento da membrana, que serve como uma estrutura bem-sucedida para as células endoteliais da córnea colhidas. Esta abordagem pode ser explorada como uma alternativa rentável para a proliferação de células endoteliais e como um modelo in vitro para estudos de engenharia de tecidos da córnea.