Jornal de Ciência e Terapia Celular
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Abstrato

Proteína de fusão TATκ de OCT-3/4 e KLF-4: linhas celulares de população mista estável, capazes de fornecer proteínas de fusão às células alvo

Fazlina Nordin, Gee Jun Tye, Joop Gaken e Farzin Farzaneh

Um conjunto de evidências em rápido crescimento mostrou que a expressão forçada de um pequeno painel de genes, incluindo Oct-3/4, KLF4, Sox2 e c-Myc, pode induzir a reprogramação de células previamente diferenciadas, para gerar células estaminais pluripotentes induzidas (iPSCs). No entanto, a geração de iPSCs por modificações genéticas aumenta o risco de transformação maligna. Assim sendo, a reprogramação in vitro eficiente de células diferenciadas, sem modificação genética irreversível, é altamente desejável. O transativador de transcrição kappa melhorado (TATκ), um TAT-HIV sintético, confere a capacidade de entregar diversas proteínas nas células alvo, tornando-se assim um potencial mecanismo alternativo de entrega para fatores de transcrição ou agentes terapêuticos. Utilizando a Proteína de Fluorescência Verde (GFP) e a Apoptina como proteínas modelo, descrevemos recentemente uma estratégia para gerar linhas celulares que secretam proteínas portadoras de um Domínio de Transdução de Proteínas HIV-TAT modificado (PTD) para subsequente captação mediada por transdução de proteínas pelas células alvo. Utilizando esta estratégia, geramos células 293T secretando os factores pluripotentes Oct-3/4 ou KLF4 em fusão com TATκ. Oct-3/4 e KLF4 foram detectados no meio de cultura da célula 293T transduzida e a captação de Oct-3/4 pelas linhas celulares hematopoiéticas JURKAT e FDCP-1 foi confirmada por análise de Western blot. O KLF4 estava presente no meio de cultura da célula produtora 293T, mas ainda não conseguimos demonstrar a captação pelas células alvo. Com base nos resultados obtidos, esperamos que estas linhas celulares de população mista estável possam desempenhar um papel importante na geração de iPSCs para fins terapêuticos.