Jornal de Ciência e Terapia Celular
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Abstrato

A gelsolina autóloga combinada com nucleótidos exógenos aumenta a diferenciação condrogénica em células estromais mesenquimais derivadas do tecido adiposo equino - uma pesquisa in vitro

Krzysztof Marycz, Monika Maredziak, Agnieszka Smieszek, Jakub Grzesiak e Anna Siudzinska

Fundamento: Atualmente, a prática veterinária envolve o tratamento de distúrbios associados à degeneração da cartilagem através de uma terapia avançada, baseada na aplicação de células estromais mesenquimais. A preparação das células para transplante requer cultura in vitro e avaliação do seu potencial condrogénico.

Objectivo : Determinar se a gelsolina autóloga derivada do soro equino e dos nucleótidos exógenos pode aumentar a atividade metabólica e a diferenciação condrogénica das células estromais mesenquimais derivadas do tecido adiposo equino (EqASCs).

Métodos: As células estaminais mesenquimais foram isoladas a partir de tecido adiposo subcutâneo equino. O meio de crescimento padrão foi suplementado com 1% de gelsolina e/ou 0,1 mg/ml de nucleótidos. A actividade de proliferação das células foi determinada com base nos resultados obtidos com o ensaio citotóxico e análise de libertação de microvesículas. A morfologia, a atividade citofisiológica e o potencial de diferenciação condrogénica foram avaliados através de microscopia ótica, fluorescente e eletrónica de varrimento. Os efeitos da estimulação condrogénica foram determinados através de (i) análise da expressão génica para as proteínas do citoesqueleto e da matriz; (ii) histoquímica dos proteoglicanos e (iii) análise do padrão de crescimento da cultura e formação de condronódulos.

Resultados: O aumento da atividade de proliferação foi observado em culturas estimuladas com nucleótidos exógenos. Embora a adição de gelsolina não tenha afetado a proliferação das EqASCs, contribuiu para a integridade do citoesqueleto. Ambos os fatores investigados influenciaram positivamente a diferenciação condrogénica – a gelsolina através da estabilização da expressão das proteínas do citoesqueleto, enquanto os nucleótidos por promoverem a formação de nódulos. A combinação de gelsolina e nucleótidos melhorou a proliferação celular, o que se refletiu por uma maior atividade celular e desprendimento de microvesículas e influenciou a formação de nódulos condro.

Conclusões: A gelsolina autóloga e os nucleótidos exógenos implementados nas culturas in vitro de células estaminais estromais mesenquimais isoladas do tecido adiposo podem aumentar a integridade celular, a proliferação e a diferenciação condrogénica destas células, pelo que podem influenciar diretamente o potencial regenerativo dos transplantes de células estaminais estromais mesenquimais derivadas do tecido adiposo utilizado para o tratamento da osteoartrite equina.