Revista de Cuidados Farmacêuticos e Sistemas de Saúde
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Abstrato

O procedimento de nanopartículas noisome preparadas por mistura microfluídica para entrega de siRNA

Mohammad A. Obeid

A interferência de RNA envolve a degradação de um RNA mensageiro alvo por meio da incorporação de RNAs de interferência curtos (siRNA) [1]. A interferência de RNA (RNAi), a ferramenta biológica mais popular pela qual o RNA de fita dupla (dsRNA) estimula o silenciamento de genes ao direcionar o mRNA complementar para degradação, é uma tremenda inovação no tratamento terapêutico universal de doenças e na transformação da maneira como os pesquisadores estudam a função dos genes. Expandindo as informações sobre os componentes subatômicos da impedância endógena do RNA, os siRNAs têm se desenvolvido como medicamentos corrosivos nucleicos imaginativos para o tratamento de doenças mortais, por exemplo, tumores malignos.

Pequenos RNAs interferentes (siRNAs) são átomos de RNA duplamente abandonados de 19–23 nucleotídeos de comprimento enganosamente combinados. Eles são rotineiramente utilizados na ciência subatômica para silenciamento transitório da qualidade da intriga. Eles inspiram a reação de RNAi após oficial para sua transcrição objetiva dependente da complementaridade da sucessão. Eles têm sido apropriadamente usados ​​para contemplar o impacto de diferentes lncRNAs oncogênicos através da perda de capacidade.

O siRNA deu novas chances para a melhoria de medicamentos inventivos para tratar doenças sérias de antemão, por exemplo, crescimento maligno. É de intensidade natural, pois faz mau uso da via endógena de RNAi, permite diminuição explícita de qualidades relacionadas a doenças e é apropriado para qualquer qualidade com um arranjo correlativo. Para a base do tratamento de qualidade intervindo por siRNA, a natureza hereditária da doença oferece forte ajuda. Verdade seja dita, vários siRNAs foram destinados a atingir oncogenes predominantes, oncogenes virais associados à carcinogênese ou oncogenes mal direcionados.

Mecanismo:

A etapa inicial do RNAi inclui o manuseio e a clivagem de RNA abandonado duplo mais longo em siRNAs, em geral com uma saliência de 2 nucleotídeos na extremidade 3' de cada fita. A proteína responsável por esse manuseio é um catalisador semelhante à RNase III chamado Dicer. No ponto em que são moldados, os siRNAs são limitados por um complexo de parte multiproteica denominado RISC (complexo de silenciamento induzido por RNA). Dentro do complexo RISC, as fitas de siRNA são isoladas e a fita com a extremidade 5' mais estável é normalmente incorporada ao complexo RISC dinâmico. A parte antisense de siRNA abandonado único naquele ponto controla e ajusta o complexo RISC no mRNA objetivo e, por meio da atividade da proteína RISC sinérgica, um indivíduo da família argonauta (Ago2), o mRNA é cortado.

Métodos:

NISV foram configurados por mistura microfluídica, que é uma técnica recentemente criada usada para preparar nanopartículas baseadas em lipídios e resulta na criação de pequenas vesículas com exemplificação eficaz de um operador restaurador. Para preparar NISV, volumes explícitos de cada arranjo de estoque das partes NISV foram combinados para configurar o estágio lipídico. O estágio lipídico foi infundido no golfo principal e o estágio fluido no segundo compartimento do micromisturador microfluídico, com a temperatura de mistura definida em 50 °C. As proporções de taxa de fluxo (FRR) entre o estágio aquoso e natural foram definidas em 3:1 e as taxas de fluxo total (TFR) dos dois estágios foram definidas em 12 ml/min. Isso leva em consideração a mistura rápida entre os dois estágios em altas taxas de fluxo e em uma temperatura acima do progresso do estágio dos lipídios. As dispersões foram então coletadas do fluxo de saída e rapidamente enfraquecidas para diminuir o último teor de etanol no planejamento para 6,25% (v/v). A avaliação da citotoxicidade do NISV foi concluída em células malignas de pulmão não pequenas (A549) e células de melanoma de camundongo (B16-F10-LUC). O siRNA com foco na proteína fluorescente verde (GFP) em células copGFP-A549, ou luciferase em células B16-F10-LUC foram tipificadas no NISV. A restrição da articulação do GFP pelo siRNA contra GFP (siGFP) transportado utilizando NISV foi avaliada por citometria de fluxo, resposta em cadeia da polimerase e Western smudging. Camundongos BALB/c nus vacinados com células B16-F10-LUC que estimulam a luciferase de comunicação do melanoma foram utilizados para pesquisar a capacidade do NISV de transportar siRNA in vivo.

Resultados:

A citotoxicidade considera demonstrado que o NISV não foi prejudicial em ou abaixo de 40 µg/ml. As definições do NISV tiveram alta eficácia de exemplificação de siRNA. A lente de aumento fluorescente e a citometria de fluxo consideram a alta absorção celular demonstrada pelas células contrastadas com o siRNA nu, que não foi absorvido pelas células. O NISV teve a opção de transportar o siGFP para as células e sufocar completamente a articulação do GFP. Esses resultados foram afirmados pela transfecção da luciferase criando células B16-F10-LUC com siRNA contra a luciferase (siLUC). A estimativa do grau de articulação da luciferase após transfecções de siLUC utilizando uma estrutura de medida de proteína da luciferase exibiu efetivamente a ocultação da articulação da luciferase. O NISV foi então utilizado em testes in vivo utilizando camundongos BALB/c nus. Após a infusão intratumoral, o siLUC foi transportado para as células e sufocou a articulação da luciferase em um nível essencialmente mais elevado do que os camundongos recompensados ​​com siLUC exposto. Esses resultados in vivo afirmam a capacidade do NISV de transportar efetivamente o siRNA para o citoplasma das células-alvo e sufocar a proteína-alvo.

Conclusão:

NISV foram exibidos amplamente e apenas porque podem ser utilizados como uma estrutura de transporte para siRNA. Esses resultados indicaram que NISV pode ser utilizado para derrotar os obstáculos, por exemplo, baixa estabilidade e baixa absorção celular, em terapêuticas baseadas em siRNA.