JM Warnecke
Introdução: O nemátode Strongyloides stercoralis é o agente causador da estrongiloidíase, que se pode manifestar em humanos com sintomas dermatológicos, pulmonares e intestinais, evoluindo frequentemente para uma doença crónica. O diagnóstico da infecção por Strongyloides stercoralis é normalmente feito através da descoberta de larvas do parasita nas faces. A produção de larvas é muito menor do que, por exemplo, a produção de ovos do Ancylostoma duodenal, pelo que a sensibilidade das técnicas convencionais é baixa A sensibilidade é aumentada por técnicas específicas, mas a infecção pode ainda não ser detectada. A estrongiloidíase pode ser uma infeção potencialmente grave em doentes imunocomprometidos. Assim, é desejável a oferta de métodos de diagnóstico sensíveis e específicos, sobretudo no contexto de doentes imunodeprimidos, em que o diagnóstico e tratamento da estrongiloidíase são de extrema importância. Especialmente em doentes imunocomprometidos. Este estudo teve como objectivo avaliar métodos serológicos e moleculares para o diagnóstico da estrongiloidíase humana em amostras de doentes imunodeprimidos previamente analisadas por métodos parasitológicos. Neste estudo, foram utilizadas ferramentas serológicas e moleculares para diagnosticar. Vários métodos serológicos, como a microscopia de fezes e as técnicas de cultura, carecem de sensibilidade; A detecção de ADN demonstrou resultados reprodutíveis com elevada sensibilidade e especificidade. Resumidamente, aproximadamente 500 mg de amostras de fezes conservadas em etanol a 70% foram lavadas duas vezes em PBS. O pellet resultante foi utilizado para a extração de ADN e avaliámos a precisão de cinco testes serológicos diferentes também utilizando um padrão de referência composto, nemátode amplamente distribuído em todo o mundo, em áreas onde as más condições de higiene permitem a manutenção da sua transmissão. No hospedeiro humano, a infecção é caracterizada por um ciclo auto-infeccioso, que pode levar ao transporte do parasita ao longo da vida se não for tratado, obtido pela combinação dos resultados de diferentes testes. O NIE-LIPS recentemente desenvolvido resultou praticamente 100% específico, com uma sensibilidade> 80% das infeções por Strongyloides. Aqui, avaliamos o desempenho analítico de um ELISA anti-Strongyloides IgG completamente único.
Métodos: O Anti-Strongyloides ELISA IgG (Euroimmun AG, Lbeck, Alemanha) baseia-se no antigénio preparado a partir de S. papillosus. A sensibilidade e a especificidade do ELISA foram avaliadas idealmente, o teste deveria tornar-se negativo ou mostrar consistentemente uma diminuição acentuada do título num tempo previsível após o tratamento bem-sucedido. O substrato enzimático, ortofenilenodiamina com peróxido de hidrogénio a 0,03% em tampão citrato fosfato 0,1 mol/L Embora alguns estudos documentem um declínio no título de anticorpos após tratamento eficaz, vários estudos apoiam a ideia de que a deteção de anticorpos específicos para parasitas pode ser um complemento útil para o diagnóstico parasitológico Os métodos imunológicos de diagnóstico incluem o ensaio imunoenzimático, um valor de corte claro ainda não foi definido em comparação com o padrão de referência serológico aplicado no Instituto de Parasitologia da Universidade de Berna, Suíça. Os testes de diagnóstico adequados são cruciais tanto para detectar indivíduos infectados por S. stercoralis como para avaliar a prevalência da infecção entre populações. Um dos principais problemas do S. stercoralis é que a sua prevalência global é provavelmente subestimada no painel de sensibilidade composto principalmente devido à falta de sensibilidade dos testes baseados em fezes que são as avaliações mais utilizadas para a infeção por S. stercoralis. Os testes serológicos são também muito úteis, mas a sua especificidade é variável nos soros positivos para anticorpos anti-Strongyloides, de acordo com o ELISA interno de referência. O painel de especificidade/reatividade cruzada incluiu 39 soros de controlo classificados como negativos para anticorpos anti-Strongyloides ou positivos para anticorpos contra outros parasitas, incluindo amostras de doentes com outras infeções parasitárias (Echinococcus, Filaria, Ascaris, Toxocara, Trichinella, Fasciola, Schistosoma, Trichuris, Amoeba, Leishmania, Plasmodium, multi-infecção n=25), doentes oncológicos (n=5) e dadores de sangue saudáveis (n=9). Os resultados limítrofes foram considerados positivos.
Resultados: Os resultados obtidos pelo ELISA Anti-Strongyloides estiveram de acordo com os testes de referência em 94,6% (53/56) de todas as amostras. No painel de sensibilidade, o ELISA Anti-Strongyloides os resultados de cada método foram comparados com os dos métodos parasitológicos e o grau de concordância foi determinado pelo coeficiente Kappa (k). A significância estatística foi estabelecida em p < 0,05. foi positivo em 16/17 soros, com uma sensibilidade de 94,1%. O soro que produz resultados discrepantes, o diagnóstico de estrongiloidíase depende da identificação de larvas em amostras fecais através de técnicas de concentração ou culturas recolhidas de um paciente com múltiplas infecções. Entre as amostras controlo, foi encontrada positividade em 2/39 casos (um doente oncológico e um dador de sangue), resultando numa especificidade de 94,9%.