Jornal de Imunologia Clínica e Celular
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Abstrato

Duas famílias CGD com uma mutação hipomórfica no domínio de ativação de p67phox

Dirk Roos, Jaap D van Buul, Anton TJ Tool, Juan D Matute, Christophe M Marchal, Bu'Hussain Hayee, M Yavuz Köker, Martin de Boer, Karin van Leeuwen, Anthony W Segal, Edgar Pick e Mary C Dinauer

Histórico do estudo: A Doença Granulomatosa Crônica (DGC) é uma imunodeficiência rara causada por um defeito na NADPH oxidase leucocitária. Esta enzima gera superóxido, que é necessário para a morte de bactérias e fungos por leucócitos fagocíticos. A maioria dos pacientes com DGC tem mutações no CYBB, o gene ligado ao X que codifica gp91 ^phox , a subunidade catalítica da NADPH oxidase leucocitária. Relatamos aqui três pacientes com DGC autossômica recessiva de duas famílias com uma mutação homozigótica em NCF2 , o gene que codifica p67 ^phox , a subunidade ativadora da NADPH oxidase.

Métodos: A atividade da NADPH oxidase leucocitária, a expressão dos componentes da oxidase e as sequências genéticas foram medidas com métodos padrão. A mutação encontrada no gene NCF2 dos pacientes foi expressa como Ala202Valp67 ^phox em células K562 para medir seu efeito na atividade da NADPH oxidase. A translocação do p67 ^phox mutado do citosol dos neutrófilos dos pacientes para a membrana plasmática foi medida por microscopia confocal e por Western blotting após purificação da membrana.

Resultados: A característica excepcional dos pacientes com CGD A67 relatados aqui é que a mutação p.Ala202Val no domínio de ativação de p67 ^phox foi claramente hipomórfica: expressão substancial da proteína p67 ^phox foi notada e a atividade da NADPH oxidase nos neutrófilos dos pacientes foi de 20-70% do normal, dependente do estímulo usado para ativar as células. A extensão da translocação Ala202Val-p67 ^phox para a membrana plasmática durante a ativação celular também foi dependente do estímulo. Ala202Val-p67 ^{phox em células K562 mediou apenas cerca de 3% da atividade oxidase normal em comparação com células transfectadas com o p67 phox} de tipo selvagem .

Conclusão: A mutação encontrada em NCF2 é a causa da atividade diminuída da NADPH oxidase e dos problemas clínicos (leves) dos pacientes. Propomos que a mutação p.Ala202Val alterou a conformação do domínio de ativação de p67 ^phox , resultando em ativação reduzida de gp91 ^phox .