Jornal de Oftalmologia Clínica e Experimental
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Abstrato

A eletroforese diferencial bidimensional em gel (2D-DIGE) revela proteínas associadas a redes de actina reticuladas em células da malha trabecular humana

Jaclyn Y Bermudez, Hannah C Webber, Gaurang C Patel, Liang-Jun Yan, Abade F Clark e Weiming Mao

Enquadramento: O principal fator de risco para o glaucoma primário de ângulo aberto (GPAA) é o aumento da pressão intraocular (PIO). Nos doentes com GPAA, a resistência ao fluxo através da rede trabecular (MT) é anormalmente elevada. Uma das importantes alterações patológicas associadas ao glaucoma na MT é a formação excessiva de redes de actina reticuladas (CLANs). As CLANs são estruturas poligonais semelhantes a teias, encontradas em células e tecidos confluentes de glaucoma TM. Os fatores associados ao glaucoma que transformam o fator de crescimento beta 2 (TGFβ2) e os glicocorticóides induzem a formação de CLAN em células TM não-glaucoma (NTM). Os CLAN podem aumentar a rigidez celular e alterar a homeostasia, contribuindo assim para a PIO elevada.

Métodos: Utilizámos uma abordagem proteómica para identificar proteínas associadas ao CLAN. Tratámos células NTM primárias confluentes com etanol a 0,1% (EtOH; veículo), dexametasona 100 nM (DEX) ou 5 ng/ml de TGFβ2 mais EtOH a 0,1% durante 7 dias para induzir CLANs. A fracção insolúvel de Triton contendo citoesqueleto foi extraída para electroforese diferencial bidimensional em gel (2D-DIGE). A espectrometria de massas (MS) foi utilizada para identificar as proteínas diferencialmente expressas nos géis 2D. A co-localização das proteínas identificadas com as CLANs foi confirmada através de microscopia de imunocitofluorescência (ICF).

Resultados: O 2D-DIGE revelou 103 proteínas expressas diferencialmente em ambos os grupos de tratamento. MSidentificou 23 das proteínas mais enriquecidas. A CIF mostrou que o caldesmon, a calponina, a cadeia leve da miosina e a tropomiosina estavam colocalizadas com as CLANs.

Conclusões: Identificámos um subconjunto de proteínas diferencialmente expressas em células NTM com formação de CLAN induzida por DEX ou TGFβ2. O potencial envolvimento destas proteínas na formação e/ou manutenção de CLAN requer investigação adicional. Estas proteínas podem fornecer novos conhecimentos sobre a patogénese do glaucoma.