A. Barbati, L. Cesarini, R. Pellegrino, GC Di Renzo, Chia Grenelli
Objetivo: A medição da Cistatina C urinária (cisto-C) pode ser uma ótima maneira de identificar precocemente recém-nascidos predispostos ao comprometimento da função renal. PETIA, PENIA e EIA são os métodos imunométricos usados para determinação quantitativa do cisto-C em fluido biológico humano, mas eles têm alguma interferência e não permitem realizar análises qualitativas. O presente estudo realiza uma validação do Immunoblot SDS-PAGE para a análise do cisto-C urinário.
Métodos: urinas foram coletadas de neonatos da enfermaria do Hospital S. Maria della Misericordia. O cisto-C urinário foi investigado pela eletroforese SDS-PAGE, o immunoblot e a leitura da densidade óptica.
Resultados: a análise qualitativa mostrou duas formas moleculares diferentes: uma reatividade em cerca de 70 KDa em todas as amostras e uma reatividade em 13 KDa em um número limitado de amostras. O coeficiente de variação para precisão do ensaio foi de 10% e para exatidão do ensaio foi de ± 10%; o limite de detecção foi de 0,009 ng/ μL e a curva de calibração tem uma boa linearidade (intervalo de 0,02-0,3 ng/ μL). A estabilidade do cisto urinário-C foi aceitável, mesmo sem o uso de inibidores de protease, se o ensaio foi realizado em urina recém-recrutada ou imediatamente após o descongelamento das amostras, armazenadas por até seis meses.
Conclusão: A análise de SDS-PAGE por imunoblot é um método válido para obter uma análise qualitativa e quantitativa do cisto urinário-C.