Engenharia Enzimática
Acesso livre

Abstrato

Um peptídeo humano protege contra leucemia induzida por terapia

R. Wiehe

O tratamento do câncer com doxorrubicina e etoposídeo aumenta o risco de rearranjos no gene da leucemia de linhagem mista ou leucemia mieloide/linfoide (MLL) [1-3], abrangendo uma região de cluster de ponto de interrupção de 7,3 kb (MLLbcr) no cromossomo 11 com um hotspot de 0,4 kb relacionado à terapia [2]. Foi demonstrado que a enzima mitocondrial endonuclease G (EndoG) se acumula no núcleo após tratamento genotóxico, induzindo estresse de replicação, onde cliva o MLLbcr [4]. Um plasmídeo repórter baseado em GFP imitando rearranjos de MLLbcr foi projetado [5] e usado para rastrear uma biblioteca de peptídeos hemofiltrados liofilizados fracionados de pacientes com insuficiência renal crônica visando a identificação de um peptídeo humano que previna rearranjos de MLLbcr. Assim, as células foram pré-tratadas com peptídeos seguidos por exposição a etoposídeo ou doxorrubicina e análise FACS para detectar a reconstituição de GFP. Após duas rodadas de fracionamento cromatográfico e análise espectrométrica de massa, identificamos um peptídeo que atenua rearranjos de MLLbcr em diferentes tipos de células sem afetar o ciclo celular ou a morte celular (imagem). A microscopia de imunofluorescência e a imunoprecipitação da cromatina revelaram que o peptídeo inibiu o acúmulo de EndoG nuclear e a ligação de MLLbcr, enquanto o dano geral ao DNA não foi influenciado pelo peptídeo. Em conjunto, descrevemos um peptídeo humano que previne rearranjos de MLLbcr ao interferir nas funções de EndoG nuclear.