Jornal de Ciências Agrícolas e Pesquisa de Alimentos
Acesso livre

Abstrato

Desenvolvimento de imunoensaios Rapidot para deteção do vírus Banana Bunchy Top

Namratha ND, Narayan BM, Chougal A e Chidanand AR

O BBTV foi utilizado como antigénio para produzir anticorpo variável de fragmento de cadeia única (scFv) utilizando tecnologia de display em fagos. Foram selecionados dois clones apresentando uma leitura mais elevada em ELISA monoclonal, nomeadamente o pBSNMAB5 e o pBSNMAB40. Os fragmentos de anticorpos de cadeia única de pBSNMAB5 e pBSNMAB40 foram subclonados no vetor de expressão corporal pQUANTa que permitiu a fusão transcricional com o fragmento de anticorpo monoclonal scFv e o gene que codifica a enzima fosfatase alcalina (PhoA). Os clones foram sequenciados com o iniciador LMB3 forward e pHEN reverse e caracterizados. Os genes scFv de ambos os clones tinham 795 pb de comprimento e verificaram que partilhavam uma sequência de homologia semelhante. Os resultados da análise BLASTn e BLASTx indicaram 85 por cento de homologia com o gene do anticorpo Fv de cadeia única anti-TNF alfa de construção sintética, cds parciais e ainda a análise BLASTx mostrou que a homologia de 86 por cento com a região variável da cadeia pesada do anticorpo das células B circulantes (Homo sapiens). Após a expressão do clone, produziu proteína de fusão de ALP juntamente com o anticorpo monoclonal pBSNMAB5 e pBSNMAB40. O conjugado scFv-ALP foi produzido contra a proteína BBTV. Utilizando este conjugado de anticorpos, foi desenvolvido um kit de deteção. Este kit de imunodiagnóstico Rapidot deteta BBTV em concentrações tão baixas como 0,9 g/ml na membrana NC e na cassete de membrana e foi também verificado cruzado com outras proteínas para avaliar a especificidade de monoclones criados contra BBTV.