Engenharia Enzimática
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Abstrato

Descobrindo mutações genéticas pela enzima: chips para um método simples e altamente delicado de clivagem de incompatibilidade enzimática

Voskarides K

A garantia de variedades obscuras de DNA é uma das questões significativas em vários campos da ciência atômica. O sequenciamento de Sanger tem sido utilizado na prática diária por esse motivo. Seja como for, quando você precisa olhar para um enorme DNA estimado ou exemplos abundantes, essa estratégia é problemática, cara e tediosa. Ultimamente, o sequenciamento futuro (NGS) tem sido utilizado em diferentes motivações por trás da triagem de mudanças. Essa enorme inovação de sequenciamento é apropriada para um tamanho de triagem de tamanho de genoma, assim como para rastrear o resumo de qualidades que causam agregados comparativos, por exemplo, diabetes de início de desenvolvimento do jovem (MODY). Na chance remota de que exemplos suficientes sejam montados sem um momento de atraso, o NGS é um sistema alegre e cativante, com base no fato de que o agrupamento de testes reduz o custo de execução por teste. No entanto, na chance remota de que você seja esperado para inspecionar 10~50 kb de agrupamento de DNA por teste único, você precisa de uma estratégia de triagem produtiva e útil. Geralmente, o polimorfismo de adaptação de fita simples (SSCP) também, a investigação heteroduplex (HA) foram as técnicas mais normalmente utilizadas por esse motivo. No entanto, a afetabilidade dessas técnicas não foi aceitável para o teste completo. Embora um número significativo de estratégias de triagem de transformação baseadas em PCR alteradas tenham sido entregues, nenhuma delas se tornou bem conhecida devido à baixa afetabilidade ou potencial carga. Duas estratégias alteradas para HA, eletroforese em gel de ângulo desnaturante (DGGE) e eletroforese em gel de ângulo de temperatura (TGGE), foram criadas para melhorar o adiamento da realocação do DNA heteroduplex no gel alterando a parte do gel ou a temperatura. Embora essas estratégias possivelmente tenham uma posição preferida sobre HA, elas requerem equipamento excepcional para executar ou fazer o gel. Dessa maneira, essas técnicas ajustadas não se tornaram tão famosas quanto o primeiro HA. A cromatografia fluida de elite desnaturante (DHPLC) é um tipo de exame de movimento de portabilidade que não inclui eletroforese, mas distingue mudanças dependentes da estação de manutenção diminuída do heteroduplex em uma seção de HPLC. Embora essa nova inovação alcance alta afetabilidade, é necessário um tedioso aprimoramento das condições de reconhecimento de mudança para cada agrupamento de DNA para adquirir a maior afetabilidade. Uma técnica de triagem de transformação ideal exigiria, por assim dizer, hardware e reagentes tradicionais; uma convenção solitária pode ser aplicada a quaisquer agrupamentos de DNA e tipos de mudança; e alcançaria alta afetabilidade, alto rendimento e execução de despesas significativas. A clivagem de bungle composta (EMC) possivelmente satisfaz esses padrões.