Jornal de antivirais e antirretrovirais
Acesso livre

Abstrato

Clones infecciosos completos do vírus Calibrachoa Mottle (CbMV)

Anju Gulati-Sakhuja e Hsing-Yeh Liu

Clones de cDNA completos derivados de RNA genómico (gRNA) e RNAs subgenómicos (sgRNAs) do vírus Calibrachoa mottle (CbMV) foram construídos sob o controlo do promotor de RNA T7 e ligados ao plasmídeo pUC-18. Os transcritos in vitro com tampa e não com tampa, sintetizados a partir do clone de cDNA genómico completo pUC-CbMV-FL geraram lesões cloróticas locais em Chenopodium quinoa inoculada mecanicamente no prazo de 10 a 15 dias após a inoculação. Os viriões da descendência recuperados de folhas sintomáticas inoculadas tinham as mesmas propriedades morfológicas que os viriões parentais. Estes viriões também reagiram positivamente com o anti-soro CbMV em ensaio imunoenzimático de sanduíche de anticorpo duplo (DAS-ELISA) e a proteína da capa viral foi detectada por Western blotting. A presença de cinco open reading frames (ORFs) no genoma do CbMV e a síntese das proteínas correspondentes por gRNA e sgRNAs foram confirmadas por Northern blotting e tradução in vitro. O local de início da transcrição de três sgRNAs de CbMV foi também determinado. A construção bem-sucedida de um clone completo de cDNA infeccioso de CbMV permite desenvolver ferramentas moleculares que podem ser utilizadas para compreender as funções genéticas deste vírus.