Andrologia-acesso aberto
Acesso livre

Abstrato

Proteína quinase independente de AMP ectocíclico - um potente regulador do canal de cálcio tipo L e da motilidade direta de espermatozoides epididimários de cabra (Capra indicus)

Debjani Nath e Mithun Shaw

Objetivo: Os espermatozoides caprinos (Capra indicus) possuem uma nova proteína quinase independente de ecto-cAMP (ecto-CIK) na superfície de sua membrana. Esta enzima mostrou alteração notável através do processo de maturação dos espermatozoides no epidídimo. Nós investigamos o papel da CIK na regulação da motilidade para frente dos espermatozoides epididimários controlando o nível intracelular de [Ca2+].
Método: As células espermáticas maduras do epidídimo caudal foram tratadas com anticorpo CIK e a inibição máxima da atividade enzimática (85%) foi observada em 120 minutos de exposição. Para analisar os mecanismos de captação de cálcio, as células foram expostas a 45Ca2+ após o tratamento com anticorpo CIK e pré-tratadas com diferentes reguladores de canais de cálcio. O sinal intracelular de [Ca2+]i foi determinado fluorometricamente usando fura 2-AM. O método de ensaio espectrofotométrico computadorizado foi usado para medir a porcentagem de motilidade para frente.
Resultado: Foi demonstrado que a captação de cálcio através dos canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L da membrana plasmática é regulada pelo CIK. O pré-tratamento de células espermáticas com varapamil (20 μM), nifedipina (20 μM) inibiu significativamente o aumento de [Ca2+]i intracelular induzido pelo anticorpo CIK. Enquanto os antagonistas da calmodulina trifluoperazina e w13 (N-(4-Aminobutyl)-5-chloro-2 naphthalenesulfonamide hydrochloride e azida sódica, um potente inibidor mitocondrial, não mostraram efeito nessa entrada de cálcio. O tratamento com ionóforo de cálcio A123187 das células tratadas com anticorpo CIK mostrou aumento insensível ao inibidor do canal da captação de cálcio. Foi observado que o verapamil (20 μM) tem papel significativo na diminuição (~50%) da motilidade direta dos espermatozoides tratados com anticorpo CIK.
Conclusão: Concluímos que o CIK é um regulador importante da motilidade direta em espermatozoides epididimais e a regulação pode ser ativada em parte pelo nível intracelular de [Ca2+]i, cuja extensão é funcionalmente conferida pelo canal de cálcio do tipo L dependente de voltagem.