Revista de Farmácia Aplicada
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Abstrato

ISOLAMENTO, CINÉTICA E ATIVIDADE ANTILEUQUÊMICA IN VITRO DA LGLUTAMINASE DE CAPSICUM ANNUM

Mohannad Idress, Mohammed Salim, Ásia El-Hassan

Este estudo tem como objetivo explorar o potencial do desenvolvimento de L-glutaminase natural isolada de pimentas verdes como um medicamento antileucêmico que seletivamente tem como alvo o metabolismo das células cancerígenas, diferentemente de outros quimioterápicos não seletivos. Isso foi feito pela determinação de sua atividade específica e condição ótima para atividade de L-glutaminase, seguida por purificação parcial e ensaio de citotoxicidade in vitro. A atividade de L-glutaminase foi medida no extrato aquoso de frutas pelo método de Nesslerização após homogeneização em nitrogênio líquido e extração com tampão de borato de sódio 0,05 M (pH 8,5). Os resultados mostraram que a atividade de L-glutaminase por miligrama de proteína total foi de 18,7 U/mg. Condições ótimas para a atividade catalítica da L-glutaminase bruta extraída de frutas de pimenta foram estudadas. Os resultados mostraram que a atividade máxima de L-glutaminase foi alcançada quando a enzima foi incubada com 250 mM de L-glutamina a 37 °C por 30 minutos na presença de solução salina tamponada com fosfato a pH 7,2. A velocidade máxima (Vmax) e a constante de afinidade (Km) da L-gutaminase foram 14,1 mM e 90,2 mM, respectivamente. A L-glutaminase bruta foi purificada por salting out usando sete concentrações diferentes de sulfato de amônio variando de 20% a 80% de saturação. A atividade específica da L-glutaminase purificada foi aumentada de 18,7 para 98,5 U/mg quando salted out em solução de sulfato de amônio a 50%. Este resultado indicou a alta eficiência da precipitação de sulfato de amônio como técnica de purificação. A avaliação da propriedade antileucêmica foi feita comparando a citotoxicidade da L-glutaminase com doxorrubicina e a combinação delas contra a linhagem celular THP-1 pelo ensaio MTT. Os resultados mostraram atividade anticâncer significativa com porcentagem de inibição de 72,75% no caso da combinação da enzima com doxorrubicina quando comparada à enzima sozinha (60,28%). Essas descobertas concluíram que a L-glutaminase de pimentas verdes pode ser desenvolvida como agente antileucêmico devido ao seu alto teor em pimentas, facilidade de purificação e citotoxicidade significativa contra células de leucemia monocítica humana.